Carcinogénesis Hormonal

1) Creación de un Biobanco de xenotrasplantes derivados de pacientes (PDX) para el desarrollo de estrategias terapéuticas de precisión en cáncer de mama

En el desarrollo de terapias personalizadas se basa el futuro de la Oncología. Se producen actualmente fármacos cada vez más sofisticados, tecnología que debe ser acompañada por el desarrollo de modelos experimentales que permitan la prueba preclínica de eficacia de los mismos. En este escenario se enmarca el desarrollo de PDX. La comercialización de los ratones inmunosuprimidos NOD scid gama (NSG), ha permitido mejorar la toma de trasplantes humanos primarios y consecuentemente la posibilidad de analizar respuestas terapéuticas precisas y enfocadas en un paciente en especial. Sin embargo, siguen existiendo muchas limitaciones para algunos tumores, y en especial para una de las neoplasias malignas de mama más frecuentes, el carcinoma luminal. El objetivo general de este proyecto es a) desarrollar un Biobanco de modelos de PDX de cáncer de mama utilizando metodologías tradicionales conjuntamente con otras más nuevas para mejorar el éxito de los mismos, b) tipificar los PDX desde el punto de vista histológico, marcadores de rutina (RE, RP, HER2 y Ki67) y otros de interés de nuestros laboratorios y caracterizar el transcriptoma del tumor utilizando Exome-Seq y ARN-Seq; c) validar el uso de los cultivos tisulares (BCTC; del inglés breast cancer tissue cultures) desarrollados a partir de los PDX (BCTC-PDX) para estudiar el efecto de distintas combinaciones de drogas que serán elegidas de acuerdo al perfil molecular de cada PDX y luego utilizar las terapias más relevantes seleccionadas de los estudios in vitro, en experimentos in vivo y d) desarrollar modelos de resistencia adquirida en los PDX ya logrados en el laboratorio para ofrecer modelos de resistencia para el ensayo de la eficacia de terapias de segunda o tercera línea. Los modelos de PDX logrados servirán a) para fortalecer y potenciar los desarrollos de otros investigadores en el país, b) ofrecer un producto local a las empresas biotecnológicas o farmacéuticas que necesiten probar sus desarrollos biotecnológicos en estudios preclinicos y c) eventualmente se pueden exportar directamente u ofrecer para licenciar su venta en empresas biotecnológicas extranjeras que se dedican a hacer estos ensayos a pedido u ofrecer en el IBYME realizar los estudios biotecnológicos con un servicio de alta tecnología (STAN)de CONICET.

2) Estudio clínico: Tratamiento con mifepristona para pacientes con cáncer de mama con mayores niveles de expresión de isoforma A del receptor de progesterona que de isoforma B

En base a los antecedentes de nuestro laboratorio de trabajos realizados previamente, diseñamos un estudio clínico para tratar con mifepristona a pacientes con cáncer de mama con niveles de isoforma A del receptor de progesterona (RP) mayores que de isoforma B durante 14 días entre la biopsia y la cirugía (MIPRA; NCT02651844). Se seleccionaron solamente pacientes que expresaban mayores niveles de PRA que PRB. El objetivo primario fue comparar marcadores de proliferación entre la muestra previa y la muestra posterior al tratamiento. El estudio se realizó en colaboración con el Hospital Magdalena V de Martínez de General Pacheco de la Provincia de Buenos Aires. Además del objetivo primario, se hicieron estudios morfológicos, de transcriptómica y proteómica de las muestras pareadas. A partir de estos resultados se abrieron nuevas líneas de trabajo para estudiar marcadores diferenciales que podrìan ser útiles para mejorar la selección de los pacientes que responderían a este tratamiento.

3) Condiciones de vulnerabilidad y su relación con el estadío de presentación a la primer consulta en pacientes con cáncer de mama que concurren al hospital Magdalena V de Martínez de General Pacheco.

El Cáncer de mama es la patología oncológica maligna más frecuente en mujeres, y una de las principales causas de muerte por cáncer. La detección temprana a través del examen mamario y la práctica de la mamografía es la mejor estrategia para la disminución de la mortalidad. La dificultad del acceso a la evaluación oportuna, por desconocimiento o barreras institucionales, constituye el principal factor de vulnerabilidad en la población. Este estudio pretende identificar, en pacientes con cáncer de mama avanzado, los factores por los cuales no concurrieron al hospital y, en consecuencia, no se realizaron los estudios correspondientes, de manera oportuna. Se trata de un estudio observacional, (exploratorio- descriptivo o correlacional, prospectivo, transversal y mixto. En base a los resultados obtenidos en este proyecto, podremos: 1) elaborar planes para mejorar la prevención, 2) optimizar el tiempo que transcurre entre la primera consulta y el comienzo de los tratamientos y, 3) trabajar junto con el municipio en campañas educativas y preventivas, para que las pacientes acudan al hospital en estadíos tempranos del cáncer de mama.

4) Terapias combinadas con ligandos de receptores de progesterona en cáncer de mama.

El 70 % de los carcinomas mamarios expresan receptores de estrógenos alfa (ER) y de progesterona (PR) y son susceptibles a la terapia endocrina. Existen dos isoformas de PR. PRB corresponde a la secuencia completa, y PRA, a una proteína truncada. Postulamos que los pacientes con tumores que expresen mayores niveles de PRA que PRB (PRA-H) pueden beneficiarse del tratamiento con antiprogestágenos tales como la mifepristona (MFP), mientras que los que expresen mayores niveles de PRB que PRA (PRB-H) podrían beneficiarse con una terapia con progestágenos. Existen actualmente ensayos clínicos con ambos tipos de ligandos. Sólo nuestro ensayo clínico MIPRA discrimina a los pacientes según la proporción de isoformas de PR para tratarlos con MFP (NCT02651844). Teniendo en cuenta que recientemente se han aprobado tres inhibidores de CDK4/6 para el tratamiento de cáncer de mama avanzado, en conjunto con la terapia endocrina, nos proponemos explorar los efectos de las terapias combinadas vs las terapias simples del inhibidor de CDK4/6 Palbocilcib (PALBO) combinado con MFP en escenarios PRA-H o con progestágenos en los PRB-H. Emplearemos tres familias de carcinomas mamarios murinos que poseen variantes PRA-H y PRB-H, del modelo conocido como «»The MPA-induced breast cancer model»», desarrollado por nuestro grupo. Ya hemos secuenciando el exoma (ExomeSeq) para conocer el perfil de mutaciones de la familia C7, y en este proyecto estudiaremos las otras dos familias, C4 y 59. Se evaluará en cada una de ellas los efectos de las terapias simples y combinadas. Asimismo se utilizarán células humanas T47D usando las variantes que sobreexpresan una u otra isoforma de PR. In vitro se analizará cómo los agentes terapéuticos regulan la proliferación celular, la expresión y activación de proteínas relacionados con el ciclo celular. En xenotransplantes de estas líneas celulares modificadas, creciendo en ratones NSG, se evaluarán las respuestas sobre el crecimiento tumoral y metástasis según corresponda para cada modelo. En xenotrasplantes derivados de tumores de pacientes (PDX) y en cultivos tisulares (BCTC) de estos PDX luminales se evaluará la respuesta in vivo y se asociará la respuesta al perfil de isoformas de PR. Por último, en BCTC realizados a partir de muestras de pacientes catalogadas por su perfil de isoformas de PR se evaluará la respuesta ex vivo. Con la información obtenida de la secuenciación del exoma del modelo murino, y de la regulación de expresión de proteínas de ciclo celular estudiadas en ensayos in vitro en este proyecto y confirmadas en cortes de tejido de los modelos in vivo, se analizarán posibles genes candidatos a tener en cuenta que nos ayuden a discriminar los pacientes en los cuales se podría predecir la respuesta a las terapias combinadas con ligandos de PR e inhibidores de CDK4/6. De lograr nuestros objetivos, se podrá disponer de un nuevo arsenal para pacientes de cáncer de mama luminal discriminados por la proporción de isoformas de PR.

5) Activación de la vía de Wnt y receptores de andrógenos inducidos por FGF2: participación en la progresión del cáncer de mama

Nuestra hipótesis es que en los carcinomas mamarios endócrino resistentes, el aumento de HMW-FGF2 intracelular contribuye a la activación de la vía de Wnt que, a su vez, regula la expresión de factores de transcripción capaces de modular la expresión de receptores de andrógenos (AR) y de progesterona (PR). La disminución en los niveles de PR junto con el aumento en los niveles de AR, jerarquizaría el rol de AR en la progresión tumoral posicionando al tratamiento con antiandrógenos (AA) como alternativa terapéutica en tumores resistentes a la terapia con antiprogestágenos (AP). Nuestro objetivo es dilucidar los mecanismos implicados en la progresión tumoral inducida por FGF2, determinando la participación de la vía de Wnt en la regulación de la expresión positiva de AR y de la regulación negativa de PR. Para ello, utilizaremos modelos experimentales que expresan ER, bajos niveles de PR y altos niveles de AR, que conformarían un subgrupo de tumores luminales representados en la clínica. Postulamos que este grupo de pacientes podría verse beneficiado por una terapia con anti andrógenos y/o inhibidores de la vía de Wnt que, a su vez restablezca la sensibilidad endócrina, y les permita acceder a una terapia más específica para este subtipo tumoral.

6) Estudio de la participación de proteínas del ciclo celular en la progresión tumoral de distintos modelos experimentales de cáncer de mama

La mayoría de los cánceres de mama humano presentan desreguladas algunas de las proteínas que controlan la división celular. En particular, la expresión de ciclina A (que regula la progresión de las fases S y G2-M del ciclo celular) estaría asociada con el pronóstico en cáncer de mama. Por otro lado, ciclina A podría actuar como un coactivador del receptor de progesterona (RP), activando genes inducidos por progestágenos. El estudio de la expresión de ciclina A en el modelo murino de cáncer de mama inducido por progestágenos reveló un posible papel de la ciclina en el mecanismo de resistencia a los antiprogestágenos. Además se observó una asociación entre los niveles de expresión de ciclina A y las isoformas del RP en un modelo de cáncer de mama humano. El objetivo general del proyecto es evaluar la participación del complejo ciclina A/CDK2 en la progresión tumoral y en la respuesta a la terapia endocrina en diferentes modelos experimentales de cáncer de mama. Para ello se silenció la expresión de la ciclina A en el modelo T47D y se está evaluando su efecto sobre la respuesta a progestágenos y antiprogestágenos tanto in vitro como in vivo. Se está analizando también la participación de la quinasa asociada a ciclina A, CDK2, en la respuesta endocrina utilizando el inhibidor roscovitina. Además se planea estudiar la interacción de la ciclina con las distintas isoformas del RP y la regulación de la transcripción de genes inducida por progestágenos/antiprogestágenos en los distintos modelos experimentales.